Teste de endotoxina em produtos de terapia celular

A importância dos produtos de terapia celular para atender às necessidades não atendidas dos pacientes

A terapia celular foi definida como a transferência de células vivas autólogas ou alogênicas para um paciente com o objetivo de curar uma doença ou aliviar seus sintomas. As células transferidas podem ser pluripotentes, multipotentes ou diferenciadas. Os produtos de terapia celular podem ser relevantes para suprir às necessidades não atendidas dos pacientes em uma ampla gama de disciplinas médicas, incluindo oncologia, medicina regenerativa, imunologia e neurologia.

Risco de contaminação em produtos de terapia celular

Os produtos de terapia celular correm o risco de contaminação durante todas as etapas de sua fabricação, incluindo a obtenção dos reagentes iniciais, o processo de fabricação e o armazenamento ou distribuição do produto final. Fontes de contaminação no laboratório podem incluir água, meio de cultura de células, soro, outros reagentes celulares, utensílio de vidro ou plástico contaminado, ou contato com pele, luvas e superfícies contaminadas. Além disso, existem diferentes tipos de contaminação, incluindo contaminação bacteriana, viral, fúngica ou por endotoxina.

Risco de contaminação por endotoxinas em produtos de terapia celular

As endotoxinas são um componente das membranas externas de bactérias gram-negativas que são liberadas principalmente durante a lise bacteriana. São pirogênios fortes que, se tiverem acesso à corrente sanguínea, podem induzir febre, endotoxemia, sepse e até choque.

Vários fatores aumentam o risco de contaminação por endotoxinas no laboratório, incluindo sua iniquidade no ambiente, resistência à autoclavagem e radiação, e afinidade com utensílios plásticos. Consequentemente, existem requisitos regulatórios rigorosos para limites de endotoxinas em produtos farmacêuticos parenterais, incluindo produtos de terapia celular, que visam prevenir a contaminação por endotoxinas.

Testes de endotoxinas durante as diferentes etapas do desenvolvimento de produtos de terapia celular

Devido à gravidade da potencial contaminação por endotoxinas, os testes de endotoxinas devem ser realizados não apenas durante o estágio final de liberação do produto, mas também durante todo o processo de fabricação, incluindo avaliações das matérias-primas e acessórios e dos materiais usados durante o processo de fabricação. 

O ensaio LAL para testes de endotoxinas em produtos de terapia celular

O padrão ouro para determinação de endotoxina, que também é usado em produtos de terapia celular, é o ensaio de lisado de amebócito Limulus (LAL). Ele se baseia na incubação de proteínas extraídas do sangue de caranguejos-ferradura com uma amostra testada para contaminação por endotoxinas. Se a endotoxina estiver presente, uma reação de coagulação será iniciada e um coágulo se formará. Existem diversas variações distintas do ensaio LAL:

• O ensaio de gel-coágulo LAL, que fornece detecção rápida e sensível, mas qualitativa, de endotoxina por meio da visualização de um coágulo formado.
• O ensaio turbidimétrico LAL (KTA), que se baseia na quantificação da turbidez (nebulosidade) da amostra analisada.
• O ensaio cromogênico LAL (KCA), que se baseia na quantificação fotométrica de endotoxina da liberação cromogênica induzida pela clivagem de um substrato cromogênico.

Ensaios de endotoxina recombinante para produtos de terapia celular

Além do ensaio LAL tradicional, foram desenvolvidos ensaios recombinantes ecologicamente corretos. Eles incluem:

• O ensaio baseado no fator C recombinante, que se baseia no Fator C recombinante, o componente inicial da cascata de coagulação dos caranguejos-ferradura.
• Ensaios recombinantes de três fatores, que imitam a cascata de reação do ensaio LAL tradicional com três fatores recombinantes.