Estratégias para Determinar Limites de Endotoxina para Amostras e Dispositivos

As endotoxinas bacterianas, que são liberadas principalmente das membranas externas das bactérias gram-negativas durante a lise bacteriana, são onipresentes no ambiente.¹ Consequentemente, a contaminação com pequenas quantidades de endotoxina pode ser esperada nas matérias-primas. No entanto, a contaminação por endotoxinas de medicamentos parenterais ou dispositivos médicos pode levar a consequências graves, incluindo a indução de febre, endotoxemia, sepse e choque.² Para evitar esse risco, produtos farmacêuticos parenterais e dispositivos médicos são examinados quanto à presença de contaminação por endotoxinas capaz de induzir efeitos negativos à saúde como parte de sua triagem regular e controle de qualidade.

Geralmente, o ensaio de lisado de amebócitos Limulus (LAL), incluindo suas versões de gel-coágulo, cromogênica ou turbidimétrica, é usado para avaliação de endotoxinas. Ensaios alternativos, como o ensaio baseado no fator C recombinante ou o teste de ativação de monócitos, podem ser usados em situações específicas, nas quais demonstraram vantagens.³

O limite de endotoxina como um valor limite para contaminação perigosa por endotoxinas

O limite de endotoxina é um valor limite para os efeitos pirogênicos de endotoxinas que contaminam uma amostra de um produto farmacêutico injetável ou um dispositivo médico. O limite de endotoxina é calculado de uma forma que depende do produto administrado, sua dose, via e tempo de administração.⁴

Determinação do limite de endotoxina para produtos farmacêuticos injetáveis

Para produtos farmacêuticos injetáveis, o limite de endotoxina é calculado usando a fórmula K/M, onde K representa a dose limiar pirogênica (indutora de febre) por kg, enquanto M representa a dose do fármaco injetado em unidades/kg/h.^4,5

Definição do limite de endotoxina para dispositivos médicos

O limite de endotoxina para um dispositivo médico é determinado com base no uso pretendido do dispositivo médico e nos tipos de tecidos com os quais ele entrará em contato dentro do corpo humano. O dispositivo médico pode ser lavado, imerso ou desmontado para coletar um extrato ou um eluato para determinação de endotoxina. Para extratos de dispositivos médicos preparados sob condições predeterminadas específicas e que têm contato direto ou indireto com o sistema cardiovascular e linfático, o limite de endotoxina foi estabelecido em 0,5 UE/mL ou 20 UE/dispositivo. Alguns dispositivos podem precisar ser adicionalmente tratados devido ao risco de interferência por revestimento anticoagulante ou a presença de metais pesados ou partículas.³

Considerações adicionais para o teste de limite de endotoxina

Considerando a necessidade de diluição da amostra – Geralmente, as amostras podem ser testadas sem diluição, a menos que haja uma substância interferente na amostra. A máxima diluição de um produto, na qual o limite de endotoxina pode ser detectada, é conhecida como a diluição máxima válida (MVD).

Armazenamento e manuseio de amostras – As condições de armazenamento e manuseio podem afetar os resultados dos testes de amostras. Portanto, a estabilidade do teor de endotoxina ensaiável nas condições de armazenamento e manuseio deve ser assegurada. Além disso, deve-se notar que as endotoxinas nativas e purificadas podem reagir de forma diferente.³

Considerando agrupamento de amostras – Em certos casos, as amostras podem ser agrupadas para a determinação dos limites de endotoxina bacteriana. Geralmente, as alíquotas são coletadas assepticamente e agrupadas para testes, enquanto os recipientes originais são preservados no caso de seus testes individuais se tornarem necessários. No entanto, amostras com MVD inicialmente baixo e suspensões não devem ser agrupadas.³

Fontes de literatura:

1. Farhana A, Khan YS. Biochemistry, Lipopolysaccharide. [Atualizado em 29 de abril de 2021]. Em: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021 Jan-. Disponível em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK554414/.
2. Sampath VP. Bacterial endotoxin-lipopolysaccharide; structure, function and its role in immunity in vertebrates and invertebrates. Agriculture and Natural Resources, 2018; 52 (2): 115-120. https://doi.org/10.1016/j.anres.2018.08.002.
3. Food and Drug Administration. Guidance for Industry: Pyrogen and Endotoxin Testing: Questions and Answers. June 2012. Disponível online em: https://www.fda.gov/media/83477/download.
4. Karen Zink McCullough. Calculating Endotoxin Limits for Drug Products. American Pharmaceutical Review. September 26, 2018.
5. European Medicines Agency (EMA) ICH guideline Q4B. Anexo 14 à Nota para Avaliação e Recomendação de Textos Farmacopeicos para Uso nas Regiões ICH sobre Testes de Endotoxinas Bacterianas – Capítulo Geral. Passo 3: Setembro 2010. EMA/CHMP/ICH/529785/2010. Disponível online em: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/draft-ich-guideline-q4b-annex-14-note-evaluation-recommendation-pharmacopoeial-texts-use-ich-regions_en.pdf.