Os desafios diários dos técnicos de CQ com testes de endotoxina

Os técnicos de controle de qualidade (CQ) são um componente crucial da força de trabalho de pesquisa. Esses técnicos devem fazer malabarismos com várias funções para manter os altos padrões de CQ em um ambiente de laboratório.

Uma das principais considerações de CQ para pesquisa biológica é a contaminação por endotoxina. A endotoxina é um componente da parede celular externa das bactérias Gram-negativas. Mesmo baixos níveis de contaminação por endotoxinas podem desencadear uma forte ativação imunológica em culturas de células ou modelos animais. Este artigo resumirá algumas das principais áreas que os técnicos de CQ devem ter em mente para manter um ambiente de pesquisa livre de endotoxinas.

Praticando técnica asséptica adequada

A técnica asséptica é uma das principais habilidades de qualquer pesquisador de biologia. A prevenção da contaminação de culturas celulares é necessária para evitar artefatos experimentais e potencial morte celular. Além disso, a contaminação em um contexto de pesquisa animal pode levar a infecções ou morte.

A maioria dos contaminantes biológicos pode ser evitada usando reagentes de esterilização padrão, como água sanitária ou etanol. No entanto, a endotoxina é altamente estável e pode persistir mesmo na ausência de bactérias viáveis. Portanto, é crucial para os técnicos de CQ manter procedimentos operacionais padrão rigorosos para a técnica asséptica.

Um exemplo de técnica asséptica relevante para a endotoxina é a prática de trocar as luvas regularmente. Um técnico de cultura celular inexperiente pode presumir que borrifar frequentemente suas luvas com etanol é suficiente para manter a esterilidade. No entanto, o etanol pode deixar para trás a contaminação por endotoxinas, por isso é importante estabelecer padrões para a frequência com que os usuários devem trocar suas luvas.

Aplicando procedimentos de esterilização rigorosos ao equipamento

A alta hidrofobicidade da endotoxina confere-lhe uma grande afinidade para artigos de plástico e vidro de laboratório. Além disso, é resistente a muitos procedimentos comuns de esterilização, como irradiação ou autoclavagem breve. Os técnicos de CQ devem tomar medidas adicionais para garantir que o equipamento de laboratório esteja livre de contaminação por endotoxinas.

Os materiais de laboratório que entrarão em contato direto ou indireto com culturas celulares ou animais devem ser submetidos a esterilização adicional, como tempos de autoclave prolongados em temperaturas mais altas. O material de laboratório de uso único deve ser adquirido de um fornecedor confiável que garanta os níveis de endotoxina abaixo de um limite aceitável. Além disso, as capelas de biossegurança devem ser completamente descontaminadas regularmente para evitar o acúmulo de contaminação por endotoxinas. 

Testando reagentes regularmente para contaminação 

Os laboratórios devem sempre se esforçar para comprar produtos com baixo teor de endotoxinas para cultura de células ou experimentos com animais. No entanto, os técnicos de CQ ainda são aconselhados a testar esses produtos para contaminação por endotoxinas sempre que um novo lote for recebido. Fontes de endotoxina podem incluir meio de cultura celular, soros, água ou suplementos de meio de cultura, como antibióticos ou outros aditivos. 

O método mais rápido e econômico para o teste de endotoxina é o teste de Lisado de Amebócito Limulus (LAL). O teste LAL tira proveito de uma enzima derivada do sangue de caranguejo-ferradura. Esta enzima inicia uma reação de coagulação na presença de endotoxina, que pode ser quantificada para produzir uma medida altamente sensível e precisa dos níveis de endotoxina.