Situação da USP em Relação ao Teste de Pirogênio e aos Métodos de Teste de Endotoxina Sem Animais

A ausência de pirogênios nocivos é um requisito crítico para a produção de injetáveis. Os pirogênios mais comuns na produção de fármacos parenterais são as endotoxinas bacterianas, que fazem parte da parede celular bacteriana gram-negativa. O Teste de Endotoxinas Bacterianas <85> definiu os principais métodos para detecção de endotoxinas bacterianas in vitro em produtos parenterais nos últimos 38 anos.[1]
No entanto, esforços contínuos priorizaram o uso de alternativas de testes de pirogênios não animais, adaptando especificamente versões não animais de testes de pirogênios e endotoxinas. 

Situação da USP no RPT e Métodos de Teste BET 

RPT (Teste de Pirogênio de Coelho) 

O teste de pirogênio garante que os produtos injetáveis apresentem risco mínimo de febre nos pacientes. Isso é abordado no capítulo geral da USP <151>. Este teste mede o aumento da temperatura em coelhos após uma injeção intravenosa da solução de teste; é projetado para produtos que os coelhos podem tolerar em doses de até 10 mL/kg por via intravenosa dentro de 10 minutos. Em casos adequados, testes in vitro validados para pirogênios ou endotoxinas bacterianas podem substituir o teste in vivo de pirogênio em coelhos.[2] 

BET (Teste de Endotoxina Bacteriana) 

A FDA e a USP aceitam vários métodos diferentes de teste de endotoxina baseados em LAL. Quatro métodos comercialmente disponíveis e aprovados pela FDA são atualmente usados para testes de liberação de produtos finais: (i) o gel-coágulo; (ii) o turbidimétrico; e (iii) o ensaio cromogênico. Os reagentes para métodos LAL devem ser provenientes de um fabricante em conformidade com o órgão regulador apropriado e ser projetados especificamente para o método pretendido. A USP <85> inclui uma descrição específica do ensaio LAL para o teste de endotoxina no contexto da testagem de pirogênio. 

Situação da USP sobre métodos de teste de pirogênio sem animais 

Reagentes recombinantes 

O Formulário Nacional de Farmacopeia dos Estados Unidos (USP-NF) foi atualizado pelo Comitê de Especialistas em Microbiologia da USP para incluir o Capítulo <86>, "Teste de Endotoxinas Bacterianas Usando Reagentes Recombinantes", autorizando assim o uso de reagentes não derivados de animais em testes de endotoxinas.[3] 

Os ensaios de endotoxina bacteriana detalhados no capítulo subsequente constituem metodologias suplementares às apresentadas no Capítulo <85>, Endotoxinas Bacterianas. Este capítulo detalha metodologias que empregam tanto o Reagente em Cascata recombinante (rCR) como o Reagente Fator C recombinante (rFC), oferecendo orientação aos fabricantes farmacêuticos sobre sua integração em procedimentos de controle de qualidade para produtos novos e existentes.[3] 

Os fabricantes que atualmente utilizam LAL para testes de endotoxinas podem prosseguir sem interrupção; este capítulo <86> não apresenta alterações em seus processos. Os Testes de Endotoxinas Bacterianas (BET) detalhados no capítulo <86> representam metodologias suplementares aos Testes de Endotoxinas Bacterianas descritos no capítulo anterior. O objetivo deste novo capítulo é facilitar o uso de reagentes não derivados de animais pelos fabricantes, consistente com o objetivo da USP de reduzir o uso de componentes derivados de animais. Este capítulo permite que os fabricantes de novos biofármacos utilizem tanto o rFC ou rCR quando precisarem realizar estudos de comparação com o método LAL. Os fabricantes de produtos estabelecidos que buscam fazer a transição para reagentes sem origem animal devem fornecer dados de comparação de métodos.[4] 

MAT (Teste de Ativação de Monócitos) 

De acordo com as diretrizes da FDA para a indústria em testes de Pirogênio e Endotoxina, é necessário realizar a validação específica do produto para determinar se uma substância ou material de teste específico é adequado para avaliação usando a técnica MAT. O processo de validação deve incluir uma validação completa das considerações encontradas na USP <1225>. A FUJIFILM Wako fabricou um kit padronizado para a detecção de pirogênios pelo ensaio MAT chamado lumiMAT™. A FUJIFILM Wako fornece um pacote de validação completo que o usuário pode replicar com a validação. Isso inclui testes contra RSE, NEPs e testes de adequação para diferentes amostras.[5] 

Referências: 

1. Rockville, Futuro dos Testes de Endotoxinas e Pirogênios: Padrões de Referência e Procedimentos. USP, 2019.
2. USP-NF/PF, 〈151〉 Teste de Pirogênio
3. Rockville, M., Comitê de Especialistas aprova testes de endotoxina usando reagentes não derivados de animais. usp, 2024.
4. USP-NF/PF, <86> Teste de Endotoxinas Bacterianas Usando Reagentes Recombinantes. 2023.
5. Sandle, T., Orientação da FDA sobre testes de pirogênios e endotoxinas.