Estado de la Farmacopea de los Estados Unidos en relación con la prueba de pirógenos y los métodos de prueba de endotoxinas sin animales
La ausencia de pirógenos nocivos es un requisito crítico para la producción de inyectables. Los pirógenos más comunes en la producción de medicamentos parenterales son las endotoxinas bacterianas, que forman parte de la pared celular de las bacterias gramnegativas. La Prueba de endotoxinas bacterianas <85> ha determinado los principales métodos para la detección in vitro de endotoxinas bacterianas en productos parenterales durante los últimos 38 años.[1]
Los esfuerzos constantes, sin embargo, priorizaron el uso de alternativas de pruebas de pirógenos sin animales, específicamente la adaptación de versiones sin animales de las pruebas de pirógenos y endotoxinas.
Estado de la Farmacopea de los Estados Unidos sobre los métodos de prueba de pirógenos en conejos (RPT) y la prueba de endotoxinas bacterianas (BET)
Prueba de pirógenos en conejos (RPT)
La prueba de pirógenos garantiza que los productos inyectables representen un riesgo mínimo de fiebre en los pacientes. Se trata en el capítulo general <151> de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP). Esta prueba mide el aumento de temperatura en conejos tras una inyección intravenosa de la solución de la prueba; está diseñada para productos que los conejos pueden tolerar en dosis de hasta 10 mL/kg por vía intravenosa durante diez minutos. En los casos adecuados, las pruebas in vitro validadas para pirógenos o endotoxinas bacterianas pueden reemplazar a la prueba in vivo de pirógenos en conejos.[2]
Prueba de endotoxinas bacterianas (BET)
La Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) y la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) aceptan varios métodos diferentes de ensayo de endotoxinas basados en la prueba de lisado de amebocitos de Limulus (LAL). Cuatro métodos comerciales aprobados por la FDA que se utilizan actualmente para las pruebas de liberación de productos finales son: (i) el coágulo de gel; (ii) el turbidimétrico; y (iii) el ensayo cromogénico. Los reactivos para los métodos de LAL deben proceder de un fabricante que cumpla con el organismo regulador correspondiente y estar diseñados específicamente para el método previsto. La USP <85> incluye una descripción específica del ensayo de LAL para pruebas de endotoxinas en el contexto de las pruebas de pirógenos.
Estado de la Farmacopea de los Estados Unidos sobre los métodos de prueba de pirógenos sin animales
Reactivos recombinantes
El Comité de Expertos en Microbiología de la Farmacopea de los Estados Unidos ha actualizado el Formulario Nacional de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP-NF) para incluir el capítulo <86>, "Prueba de endotoxinas bacterianas mediante reactivos recombinantes", autorizando así el uso de reactivos de origen no animal en las pruebas de endotoxinas.[3]
Los ensayos de endotoxinas bacterianas que se detallan en el capítulo subsiguiente constituyen metodologías complementarias a las presentadas en el capítulo <85>, Endotoxinas bacterianas. En este capítulo se detallan las metodologías que emplean tanto el reactivo de cascada recombinante (rCR) como los reactivos del factor C recombinante (rFC), y se ofrece orientación a los fabricantes farmacéuticos sobre su integración en los procedimientos de control de calidad de productos nuevos y existentes.[3]
Los fabricantes que actualmente utilizan el lisado de amebocitos de Limulus (LAL) para las pruebas de endotoxinas pueden proceder sin interrupción; este capítulo <86> no presenta alteraciones a sus procesos. Las pruebas de endotoxinas bacterianas (BET) detalladas en el capítulo <86> representan metodologías complementarias a la prueba de endotoxinas bacterianas descrita en el capítulo anterior. El propósito de este nuevo capítulo es facilitar a los fabricantes el uso de reactivos no derivados de animales, en consonancia con el objetivo de la USP de reducir el uso de componentes derivados de animales. Este capítulo permite a los fabricantes de nuevos productos biofarmacéuticos utilizar rFC o rCR que necesiten realizar estudios comparativos con el método LAL. Los fabricantes de productos establecidos que deseen realizar la transición a reactivos sin animales deberán proporcionar datos de comparación del método.[4]
Prueba de activación de monocitos (MAT)
De acuerdo con las directrices de la FDA para la industria sobre las pruebas de pirógenos y endotoxinas, es necesario llevar a cabo una validación específica del producto para determinar si una sustancia o material de prueba específico es adecuado para su evaluación mediante la técnica de activación de monocitos (MAT). El proceso de validación debe incluir una validación completa de las consideraciones que se encuentran en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) <1225>. FUJIFILM Wako ha fabricado un kit estandarizado para la detección de pirógenos mediante el ensayo MAT denominado lumiMAT™. FUJIFILM Wako proporciona un paquete de validación completo que el usuario puede replicar con la validación. Esto incluye pruebas contra RSE (endotoxina estándar de referencia), NEPs (pirógenos sin endotoxina) y pruebas de idoneidad adjuntas para diferentes muestras.[5]
Referencias:
- Rockville, Future of Endotoxins and Pyrogen Testing: Reference Standards and Procedures. USP, 2019.
- USP-NF/PF, ⟨151⟩ Pyrogen Test.
- Rockville, M., Expert Committee approves endotoxin testing using non-animal derived reagents. usp, 2024.
- USP-NF/PF, <86> Bacterial Endotoxins Test Using Recombinant Reagents. 2023.
- Sandle, T., FDA guidance on pyrogens and endotoxin testing.