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Método LAL cinético-turbidimétrico para la detección de endotoxinas (PYROSTAR™)

28th February 2019

Método LAL cinético-turbidimétrico para la detección de endotoxinas (PYROSTAR™)Las endotoxinas bacterianas son un componente lipopolisacárido (LPS) de membranas de células de bacterias gram negativas. La presencia de endotoxinas puede ser detectada por un método específico y eficiente conocido como el ensayo de Lisado de Amebocito Límulus (LAL).  El ensayo LAL se desarrolló en los años sesenta y se basa en la reacción de coagulación de la hemolinfa de los cangrejos de herradura atlánticos con antígenos presentes en la superficie microbiana como las endotoxinas. Se han desarrollado varios reactivos para optimizar la eficiencia de detección del ensayo LAL y para hacer que el proceso sea más rápido y conveniente.

PYROSTAR™ ES-F, fabricado por FUJIFILM Wako, es uno de los activos generalmente utilizados para la detección de endotoxinas bacterianas y contiene Lisado de Amebocito Límulus, curdlan carboximetilado (CMC), tampones y cationes monovalentes y divalentes.

PYROSTAR™ ES-F es muy sensible y es capaz de detectar endotoxinas en un rango cuantitativo de 0,001 a 10 EU/ml, dependiendo de la sensibilidad utilizada. Este ensayo, además de las instalaciones de manufactura asociadas con el mismo, están completamente licenciadas por la FDA (Food and Drug Administration: Administración de Medicamentos y Alimentos).

PYROSTAR™ ES-F contiene el reactivo lisado turbidimétrico liofilizado que permite la medición simultanea de múltiples muestras. También es un reactivo único ya que contiene curdlan carboximetilado (CMC) que ha sido co-liofilizado con el LAL para que el reactivo sea completamente específico para las endotoxinas. Esta formulación patentada evita la interferencia de betaglucanos presentes en las membranas de células bacterianas que pueden afectar los resultados del ensayo LAL.

El método usado para la detección de endotoxinas mediante el reactivo PYROSTAR™ ES-F es turbidimétrico cinético o KTA. El ensayo turbidimétrico cinético puede evaluar cuantitativamente el nivel de endotoxinas de un producto con un mayor grado de precisión en relación con cualquier otra metodología utilizada.

PYROSTAR™ ES-F se puede comprar en configuraciones multi-ensayo y de ensayo único, con o sin Endotoxinas estándar de control (CSE). CSE es un reactivo liofilizado que se ha desarrollado a partir de E. coli y se usa como el ensayo estándar para confirmar la sensibilidad de los reactivos LAL, preparar controles de ensayo y validar los métodos de ensayo de productos.

El vial de CSE contiene 500 ng de endotoxinas. Cada vial se ensaya en comparación con las endotoxinas de referencia de la FDA y se determina el factor de conversión (EU/ml). Para reconstituir el CSE, estire ligeramente y retire la tapa de goma del vial para liberar el vacío. Determine el volumen de LRW a añadir al vial para crear una solución de 1,000 EU/mL. Añada el volumen determinado de LRW al vial y vuelva a colocar la tapa de goma.  Invierta y agite el vial vigorosamente varias veces durante 2 minutos.

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El CSE reconstituido se puede almacenar durante un mes a 2-10 °C. El CSE no debe almacenarse a temperaturas bajo cero. Al usar una solución almacenada previamente, agite vigorosamente durante un minuto antes de su uso.

Los reactivos turbidimétricos cinéticos requieren un lector de multi-tubo o microplacas junto con software de medición de endotoxinas para obtener valores cuantitativos de endotoxinas. La detección de endotoxinas con PYROSTAR™ ES-F es posible sin verse afectada por los (1 → 3) - β-D -glucanos en la muestra. También se puede usar una pequeña cantidad de la muestra para realizar el ensayo ya que solo se necesita un volumen de 100 µL para el lector de tubo y 50 µL para el lector de microplacas. Además, debido a los tampones contenidos en el reactivo, los valores de pH en las muestras tienen un impacto insignificante, lo cual permite obtener mediciones de endotoxinas estables.

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 Accesorios para Método LAL Kit de Reactivos LAL
Accesorios para Método LAL Kit de Reactivos LAL

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By: Lisa Komski In: Kit LAL