Elección del reactivo más adecuado para sus necesidades de análisis
La elección de reactivos apropiados con una calidad adecuada es un prerrequisito para la generación de resultados experimentales precisos y confiables a partir de pruebas de laboratorio. Sin embargo, no existen directrices universales sobre el proceso de selección, y cada laboratorio o institución desarrolla sus propias normas y procedimientos. Además, puede resultar difícil evaluar los numerosos productos disponibles de diversos fabricantes. A continuación se exponen cinco factores en los que debe pensar a la hora de seleccionar reactivos para sus necesidades experimentales:
1. Considerar la variabilidad entre lotes
Las características de los reactivos pueden mostrar variaciones de lote a lote, lo que puede afectar negativamente la confiabilidad de los resultados experimentales.1 La importancia relativa de las variaciones de lote depende también de las especificidades y el propósito de los experimentos planeados (por ejemplo, si forman parte de investigaciones clínicas o de investigación). Por lo tanto, habitualmente cada laboratorio establece sus propios procesos para evaluar y tratar las variabilidades entre lotes. Diferentes organizaciones, entre ellas el Clinical and Laboratory Standards Institute, también han propuesto protocolos para la evaluación de nuevos lotes.2
2. Seleccionar reactivos con grados de pureza adecuados
Los reactivos se fabrican con diferentes grados de pureza, incluidos los grados ACS, reactivo, USP, NF, laboratorio, purificado y técnico. La selección de un reactivo con una pureza adecuada debe realizarse teniendo en cuenta la finalidad prevista de los experimentos planificados y, si corresponde, las normas reglamentarias. Además, los reactivos pueden dividirse en reactivos "para uso exclusivo en investigación" (RUO, por sus siglas en inglés) y reactivos producidos de acuerdo con las buenas prácticas de fabricación (GMP, por sus siglas en inglés), que se fabrican con diferente grado de rigurosidad.3 Se puede obtener información adicional comprobando la certificación de un proveedor de reactivos con la Organización Internacional de Normalización (ISO, por sus siglas en inglés).3
3. Comprobar la compatibilidad de un reactivo con su equipamiento de laboratorio
Para cada nuevo reactivo o kit de reactivos, debe comprobarse su compatibilidad con el equipamiento de laboratorio disponible. Por ejemplo, el ensayo de LAL in vitro, que es el ensayo de endotoxinas más utilizado, puede realizarse mediante tres técnicas diferentes: un ensayo de coágulo de gel, cromogénico o turbidimétrico.4 En los laboratorios que no disponen de la infraestructura necesaria para realizar los ensayos de LAL cuantitativos cromogénicos o turbidimétricos, el ensayo de LAL cualitativo de coágulo de gel puede llevarse a cabo sin necesidad de equipos costosos.
4. Analizar el potencial de alto rendimiento, los requisitos de tiempo y el costo del reactivo
En un laboratorio de diagnóstico o investigación con mucho trabajo, el tiempo y la escalabilidad son consideraciones importantes. Sin embargo, en otros entornos, en los que sólo se analiza un número reducido de muestras, el costo puede ser una preocupación más importante. En el ejemplo del ensayo LAL, los ensayos cromogénico y turbidimétrico permiten la realización de experimentos cuantitativos y de alto rendimiento, ahorrando tiempo y proporcionando resultados cuantitativos. En cambio, el ensayo de coagulación en gel permite una evaluación rápida y rentable, pero cualitativa, de muestras individuales.
5. Revisar las pautas disponibles públicamente para la selección de reactivos
Se han propuesto pautas para un proceso estructurado de selección de reactivos, que puede resultar útil a los investigadores a la hora de elegir los reactivos para los experimentos que tienen planificados. Por ello, los científicos han elaborado unas guías en las que se califican los reactivos de uso frecuente en función de su composición química, su potencial para 15 transformaciones, sus riesgos para la seguridad y el medio ambiente y su ciclo de vida.5
La elección de los reactivos más adecuados para las necesidades de análisis del laboratorio es una tarea compleja y ardua. Tener en cuenta la variabilidad de los lotes, la pureza de los reactivos, la compatibilidad de los equipos, los requisitos de tiempo y escalabilidad y las pautas disponibles públicamente para la selección de reactivos puede facilitar y agilizar este proceso.
Fuentes bibliográficas:
- Thompson S, Chesher D. Lot-to-Lot Variation. The Clinical Biochemist Reviews 2018;39(2):51-60.
- Clinical and Laboratory Standards Institute. CLSI document EP26-A. Wayne, PA, USA: CLSI; 2013. User Evaluation of Between-Reagent Lot Variation; Approved Guideline.
- Perry G. How Pure is Pure? Understanding Reagent Purity Grades. Pharmaceutical Technology 2021;45(9):40–42.
- Suvarna K. Endotoxin detection methods – Where are we now? American Pharmaceutical Review 2015, August 25.
- Adams JP, Alder CM, Andrews I, Bullion AM, Campbell-Crawford M, Darcy MG, Hayler JD, Henderson RK, Oare CA, Pendrak I, Redman AM. Development of GSK's reagent guides–embedding sustainability into reagent selection. Green Chemistry 2013;15(6):1542-1549.
