Problemas diarios de los Técnicos de Control de Calidad con los Ensayos de Endotoxinas
Los técnicos de control de calidad (CC) son un componente crucial de la plantilla de investigación. Estos técnicos deben practicar múltiples funciones para mantener altos estándares de control de calidad dentro del entorno de laboratorio.
Una de las principales consideraciones de CC para la investigación biológica es la contaminación por endotoxinas. Las endotoxinas son un componente de la membrana celular de las bacterias gramnegativas. Incluso niveles bajos de contaminación por endotoxinas pueden desencadenar una fuerte reacción inmunitaria en cultivos celulares o modelos animales. Este artículo resumirá algunas de los aspectos principales que los técnicos de control de calidad deben tener en cuenta para mantener un entorno de investigación libre de endotoxinas.
Practicar una técnica aséptica adecuada
La técnica aséptica es una de las habilidades centrales de cualquier investigador de biología. Es necesario prevenir la contaminación de cultivos celulares para evitar artefactos experimentales y una posible muerte celular. Además, la contaminación en un contexto de investigación animal podría provocar infecciones o la muerte.
La mayoría de los contaminantes biológicos se pueden evitar utilizando reactivos de esterilización estándar, como lejía o etanol. Sin embargo, las endotoxinas son muy estables y pueden persistir incluso en ausencia de bacterias viables. Por lo tanto, es crucial para los técnicos de control de calidad mantener procedimientos operativos estándar rigurosos para la técnica aséptica.
Un ejemplo relevante de una técnica aséptica para las endotoxinas es la práctica de cambiarse los guantes con regularidad. Un técnico de cultivos celulares sin experiencia podría asumir que rociar frecuentemente sus guantes con etanol es suficiente para mantener la esterilidad. Sin embargo, el etanol puede no eliminar la contaminación por endotoxinas, por lo que es importante establecer directrices sobre la frecuencia con la que los usuarios deben cambiarse los guantes.
Aplicar rigurosos procedimientos de esterilización al equipo
La alta hidrofobicidad de las endotoxinas les confiere una gran afinidad por los materiales de vidrio y plástico del laboratorio. Además, es resistente a muchos procedimientos de esterilización habituales, como la irradiación o el autoclave breve. Los técnicos de control de calidad deben tomar medidas adicionales para garantizar que el equipo de laboratorio esté libre de contaminación por endotoxinas.
El material de laboratorio que vaya a entrar en contacto directo o indirecto con cultivos celulares o animales debe someterse a una esterilización adicional, como tiempos prolongados de autoclave a temperaturas más altas. El material de laboratorio de un solo uso debe comprarse de un proveedor de confianza que garantice niveles de endotoxinas por debajo de un umbral aceptable. Adicionalmente, las campanas de bioseguridad deben descontaminarse a fondo de forma regular para evitar la acumulación de contaminación por endotoxinas.
Comprobación periódica de los reactivos en busca de contaminación
Los laboratorios siempre deben esforzarse por comprar productos con bajo contenido de endotoxinas para cultivos celulares o experimentos con animales. Sin embargo, se recomienda a los técnicos de control de calidad que analicen estos productos en busca de contaminación por endotoxinas cada vez que reciban un nuevo lote. Las fuentes de endotoxinas pueden incluir medios de cultivos celulares, sueros, agua o suplementos de medios de cultivo como antibióticos u otros aditivos.
El método más rápido y rentable para comprobar la existencia de endotoxinas es el ensayo de lisado de amebocitos de Límulus (LAL). El ensayo LAL utiliza una enzima derivada de la sangre del cangrejo herradura. En presencia de endotoxinas, esta enzima inicia una reacción de coagulación que puede cuantificarse para dar una lectura muy precisa y sensible de los niveles de endotoxinas.
